Наши исследования были направлены на изучение путей повышения специфичности препаратов для дифференциации туберкулеза и микобактериоза. С помощью бараньих и бычьих антисывороток к М. bovis в составе негретых культуральных жидкостей М. bovis и М. tuberculosis в перекрестном иммуноэлектрофорезе (ПИЭФ) обнаружено соответственно 24 и 21 антиген. Из них 14 давали перекрестные реакции с антисыворотками к атипичным микобактериям, 2 были, предположительно, специфичны для возбудителей туберкулеза. Специфичность остальных не установлена.
При изучении ППД туберкулина в ПИЭФ обнаружено 20 антигенов, из которых только половина давала видимые преципитаты, 6 из них постоянно встречались во всех изученных сериях препарата. Эти данные свидетельствуют о низкой эффективности метода очистки, из-за чего ППД туберкулин сохраняет основную массу антигенов культуральной жидкости, только часть из них теряет способность преципитироваться антителами. Установлено, что наибольшей активностью, но низкой специфичностью отличается ультразвуковой дезинтегрант бактериальной массы М. bovis. Культуральная жидкость была наиболее специфичной и по активности превосходила ППД туберкулин. Автоклавирование на 30-40 % снижало серологическую активность препаратов.
Для изучения антигенных компонентов, предположительно специфичных для возбудителей туберкулеза млекопитающих, использовали кроличью антисыворотку к М. bovis, истощенную дезинтегрантами бактериальной массы атипичных микобактерий 6 видов. В радиальной иммунодиффузии по Ouchterlony (РИД) выявлено, что у различных штаммов М. bovis, БЦЖ и М. tuberculosis присутствуют 4 практически идентичные антигенные компоненты, 2 из которых выдерживают 15-минутное автоклавирование при 120 °С. В иммунодиффузии по Mancini установлено, что наибольшая концентрация таких антигенов была в воднофенольном (0,25 %) экстракте клеточных стенок. На 15—20 % она была ниже в культуральных жидкостях, дезинтегрантах и твиновых экстрактах бактериальной массы. Тем не менее меньшее содержание общеродовых антигенов, простота получения делают культуральные жидкости более предпочтительным источником антигенов.
С помощью гель-фильтрации на ультрогеле АсА 44, ракетного иммуноэлектрофореза, РИД и кожной пробы определили связь размера молекул с их активностью и специфичностью. Установлено, что профиль элюции культуральных жидкостей М. bovis и М. tuberculosis состоит из 3 основных пиков. Первый — с массой более 130 кД содержал 5—6 антигенов, дававших выраженные перекрестные реакции. Второй пик был очень низким и растянутым (1000-24 кД). В его составе обнаружено 14 антигенов, которые обладали наиболее высокой активностью в РИД и в кожной пробе. Третий, самый высокий пик (93 % массы исходного препарата), содержал следы 1-2 антигенов и имел очень низкую аллергическую и серологическую активность.
Практически все элюаты содержали перекрестно реагирующие антигены, удаление которых с помощью физико-химических методов было весьма затруднительным. Лучшие результаты достигнуты при использовании аффинной хроматографии с применением антител к общеродовым антигенам. С ее помощью получен очищенный, достаточно гомогенный в диск-электрофорезе препарат специфических антигенов ППД туберкулина, который испытан в эксперименте и условиях производства на 290 головах коров, инфицированных микобактериями. Очищенный препарат оказался достоверно более специфичным исходного ППД туберкулина и практически не выявлял животных, инфицированных атипичными микобактериями.
Для серологической дифференциации туберкулеза и микобактериоза получен видоспецифический антиген М. bovis, который в РИД выявлял только больных туберкулезом животных (12—75 %).